发酵检查杂菌的五个方法是什么(发酵检查杂菌的五个方法有哪些)

导语：发酵检查杂菌的五个方法

在发酵过程中，如何及早发现杂菌的污染并及时采取措施加以处理，是避免染菌造成严重经济损失的重要手段。

因此，生产上要求能准确、迅速地检查出杂菌的污染。目前常用方法主要有显微镜检查法、肉汤培养检查法、双碟（平板）培养法、发酵过程的异常观察法等。

1.显微镜检查法（镜检法）

用革兰氏染色法对样品进行涂片、染色，然后在显微镜下观察微生物的形态特征，根据生产菌与杂菌的特征进行区别，判断是否染菌。如发现有与生产菌形态特征不一样的其他微生物存在，就可判断为发生了染菌。此法是最简单、最直接，也是最常用的检查杂菌的方法之一。必要时还可进行芽孢染色或鞭毛染色。

2.肉汤培养检查法

将需检查样品接入灭菌并经过检查无菌的肉汤培养基中，放置在37℃和27℃条件下分别培养24h，进行观察，并取样镜检。此法常用于检查培养基和无菌空气是否带菌，也可用于噬菌体检查，此时使用生产菌作为指示菌。

3.双碟培养法

种子罐样品先放入肉汤培养基中，然后在无菌条件下在双碟培养基上画线，剩下的肉汤培养物在恒温培养箱内培养6h后再画线一次。发酵罐培养液直接放入空白无菌试管中，于37℃下培养6h后在双碟培养基上画线。24h内的双碟定时在灯光下检查有无杂菌生长。24～48h的双碟定时1d检查一次，以防止缓慢的杂菌漏检。

噬菌体检查可采用双层平板培养法，底层同为肉汁琼脂培养基，上层减少琼脂用量。先将灭菌的底层培养基熔解后倒入平板，凝固后，将上层培养基熔解并保持在40℃，加生产菌作为指示菌和待检样品混合后迅速倒在底层平板上，置于培养箱保温培养，经12～20h培养，观察有无噬菌斑产生。

4.基于PCR技术的检查方法

以上三种检查杂菌的方法是根据生产菌与杂菌的形态、生理生化反应来确定的，也可以从生产菌和杂菌的基因序列来区分，从基因水平检测首先得到能反映生产菌和杂菌特征性的基因， 16S rRNA和18S rRNA基因分别作为细菌和真菌鉴定的一项重要指标。可以用16S rRNA和18S rRNA基因来判断发酵系统中是否污染杂菌。

5.基于发酵过程异常现象的检查方法

除以上方法外，还可以从发酵过程的异常现象来判断是否染菌，如溶解氧、pH值、排气中CO2含量和菌体酶活力等变化来判断。

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