ihc抗原修复的意义(抗原修复是什么意思)

导语：IHC专题——抗原修复

在样本制备的过程中，往往会应用一些试剂（如多聚甲醛、福尔马林等）对新鲜组织进行处理，这个过程可能导致抗原位点被封闭，为了避免影响后续免疫染色的效果，我们需要先对切片进行抗原修复。对于石蜡切片来说，抗原修复是不可或缺的步骤，常用的方法有酶消化法和热修复法。

1、酶消化法

作为最早的抗原修复方法，常用的消化酶有三：胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白酶K。但酶的作用极易受温度影响，如果消化不足，则无法充分暴露出抗原位点，过度的消化又会破坏组织结构，影响最后阳性信号的判读，因此在后续的发展中，酶消化法渐渐被热修复技术所替代，但对于个别抗原，如免疫球蛋白、补体，以及在甲醛固定、石蜡包埋的肾活检中，酶消化法依旧不可替代。

2、热修复法

抗原热修复是采用高温、高压方法配合合适的抗原修复液，使得被固定液封闭的抗原位点重新暴露，提高抗体的阳性检出率。

最常用的抗原修复液有两种：柠檬酸钠缓冲液（pH=6）、EDTA缓冲液（pH=8或9），一般来说一抗的说明书都会写明需要选择哪种修复液。如果说明书没有推荐，柠檬酸钠缓冲液能够适配大部分的抗体，EDTA缓冲液相对修复效果更强，但阳性增强的同时也会提高非特异背景，一些比较难表达的抗体可以选择EDTA缓冲液。

常见热修复方法对比

热修复方法

微波热修复

水浴热修复

高压热修复

操作

在染色盒中加入抗原修复液，放入切片，置于微波炉中高火煮沸，低火维持15min后取出染色盒，冷却至室温

在染色盒中加入抗原修复液，放入切片，置于水溶锅中加热，其间不断用温度计测其温度，待抗原修复液的温度达到有效温度（92℃↑），维持40min后取出染色盒，冷却至室温

在染色盒中加入抗原修复液，放入切片，置于高压锅内加热至饱压后继续加热5min，关闭电源，10min后取出染色盒，冷却至室温

优点

加热的时间和温度都可以有所调整

温和，均匀，不易脱片，对组织形态结构影响少

受热均匀，暴露抗原位点效果好，受环境条件影响小，可重复性高

缺点

时间长，修复液容易蒸干，需要及时观察补充；受热容易不均匀，沸腾易导致脱片；不同微波炉功率有差异，难以标准化

需要较长时间；染色盒材料不同，热传导性不同，会影响加热效果，容易出现抗原表达弱、阳性率低的结果

易导致脱片；使用高压锅要小心蒸汽烫伤，使用要规范谨防锅内蒸汽过饱和引发事故

小爱温馨提示，没有哪一种抗原修复液或者修复方法能够适配所有的抗体和样本，最佳条件还是需要在摸索实践中确定哦！

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