细菌内毒素检测方法光度法(细菌内毒素光度法原理)

导语：细菌内毒素检查法(定量检测)之光度测定法

​细菌内毒素检查法(定量检测)之光度测定法试验应在特定的仪器中进行，温度一般为37℃±1℃。为保证浊度和显色试验的有效性，应预先进行标准曲线的可靠性试验以及供试品溶液的干扰试验。当试验环境中发生了任何可能影响检测结果的改变时，试验的有效性应重新检测。

​1.标准曲线的制备

用标准内毒素配成溶液并制成至少3个浓度的稀释液(稀释度不得大于10)，最低浓度不得低于所用鲎试剂的标示检测限。每一稀释步骤的混匀时间同凝胶法，每一浓度至少做3支平行管。同时要求做2支阴性对照。当阴性对照在设定的时间内不发生反应，将全部数据进行线性回归分析。根据线性回归分析，标准曲线的相关系数(r)的绝对值应该大于或等于0.980.试验方有效。否则须重新试验。

2.细菌内毒素检查法(定量检测)之光度测定法：

按“光度法的干扰试验”中的操作步骤进行检测。使用溶液C生成的标准曲线来计算溶液A的每一平行管的内毒素浓度。选择标准线中点或一个靠近中点的内毒素浓度。制备溶液A、B、C和D。供试品和鲎试剂的加样量、供试品和鲎试剂的比例以及保温时间等，参照所用仪器和试剂的有关说明进行。每种溶液至少做2个平行管。

细菌内毒素检查法-试验须符合以下三个条件方为有效：

1.系列溶液C的结果要符合“光度技术预试验”下“标准曲线的可靠性试验”中的要求。

2.用溶液B中的内毒素浓度减去溶液A中的内毒素浓度后，计算出的内毒素的回收率要在50%-200%的范围内。

3.溶液D(阴性对照)在规定的反应时间内未检测出内毒素。

若供试品溶液所在平行管的平均内毒素浓度乘以稀释倍数和浓度后，小于规定的内毒素限值，判供试品符合规定。若大于规定的内毒素限值，判供试品不符合规定。​​​​

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